密理博/Millirore INYC00010 尼龍膜

millipore正電荷尼龍膜0.45um孔徑INYC00010 30cm*3m
 

Northern 和 Southern Blotting，以及 Colony 和 Plaque Lifts

Millipore 提供了一種用于核酸應用轉印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉印膜可以在 Southern blotting、Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實驗中獲得出色的結果。 Immobilon-NC 轉印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實驗方案中最初使用的膜，也可作為一種靈敏度較低但更經濟的選擇。

 

說明: Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍卷膜，0.45 μm，30 cm x 3 m

商標名: Immobilon

數量/包裝: 1

應用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌轉印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析

濾膜孔徑，μm: 0.45

相容的染料: Non-applicable

可潤濕性: 親水

主要吸附機制: 離子，紫外線固定后為共價的

濾膜尺寸，cm x cm: 30 x 300

替代物: INCP 000 10（核酸應用）

濾膜代碼: INYC

濾膜顏色: 白色

產品名稱: Immobilon-Ny+ Transfer Membrane

濾膜表面: 光面
 

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉印膜，非常適合于可靠與可重現的轉移、固定、雜交及隨后的重復雜交實驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到最高的靈敏度和最低的背景信號。 此膜經強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復雜交試驗至關重要。

可提供詳細的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉印膜時可用于優化轉印結果。


 

• 靈敏度最高，而背景信號最小
   
• 非常出色的重復雜交特性
   
• 在化學發光法和放射性檢測系統中均表現出色

 

性能

Southern Blotting

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優化實驗方案下的表現：每種膜在其推薦的紫外波長照射下交聯。 Immobilon-Ny+ 轉印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復雜交之后的信號強度

尼龍膜在 254 nm 交聯，并進行了多次重復雜交，依次為：用 ³²P 標記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 ³²P 標記探針做第 7 次雜交，然后進行 5 次模擬雜交以及用 ³²P 標記探針做第 13 次雜交。 在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實雜交完全一樣，區別在于未加 ³²P 標記探針。 在整個重復雜交過程中， Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產品 A 和 B 的兩倍。

檢測靈敏度

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條帶）中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應。 大約相當于 10 μg 人類基因組 DNA 中一個單拷貝基因序列。 可通過對探針濃度加倍來提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中，與競爭產品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉印膜靈敏度稍高，而背景信號更低。

用化學發光檢測進行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA （1 μg） 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離，然后通過毛細作用轉印到 Immobilon-Ny+ 轉印膜和競爭產品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比，通過紫外交聯固定RNA 能增強信號。 Immobilon-Ny+ 轉印膜比競爭產品 A 表現出更高的靈敏度。

Colony Lifts

將載有 pUC19 或 pLH2（2.0  kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細菌懸浮液置于瓊脂培養皿中，在 37°C 下培養過夜。 將培養皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1–2 mm）轉印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉印至競爭產品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在254 nm， 60,000 μJoules/cm² 紫外光照射下  交聯。 然后用 a ³²P 標記的 DNA 探針對膜進行雜交，并使用磷屏成像系統顯色。